推 Valeriev:請問你有放pcr的positive control跟negative control嗎? 05/05 01:00
推 Valeriev:然後你的enzyme切出來之後會是幾個band? 大小各多少呢? 05/05 01:03
推 Valeriev:還有呀, 你的insert是藉由pcr的方式夾出來的嗎? 05/05 01:05
推 Valeriev:如果是的話可能是pcr出錯或是primer上的re切位有錯 05/05 01:07
推 EROICAA:容我直說，還蠻標準的偽陽性.... 05/05 05:16
→ EROICAA:看來這個版上對colony PCR 不熟悉還真不少 05/05 05:17
→ EROICAA:相關問題我以前已經回過一篇，就不再重複了 05/05 05:18
→ EROICAA:祝實驗順利 ：） 05/05 05:18
推 EROICAA:補充一句，要減少偽陽性的現身，作為template的colony 05/05 05:21
→ EROICAA:titration要調好，不要以為越多越好 05/05 05:22
→ EROICAA:（不過我沒說原po 一定有這方面的問題） 05/05 05:23
推 NKTcell:第三章的圖總覺得怪怪的 因為pcDNA3.1即使用BamHI&EcoRI下 05/05 11:46
→ NKTcell:去切 也不應該會有麼多的fragment 05/05 11:48
推 sakuru:BamHI 跟EcoRI都很容易有star activity阿，會不會是enzyme 05/05 12:11
→ sakuru:下太多然後亂切？ 還有應該不用切到6ug吧？ 切個1ug就會染 05/05 12:12
→ sakuru:的很漂亮了.. (然後你跑膠要load uncut vector做對照阿) 05/05 12:13
推 pan7353:我也覺得是E大說的false-positive（我就是被回答的人） 05/05 20:29
→ pan7353:(汗!)建議你用vector上的primer做colony pcr 並記得放 05/05 20:30
→ pan7353:negative control 可放一個藍colony（用藍白篩的話） 05/05 20:31
→ pan7353:或不放template檢視是否reagent被污染了 ^ ^ 05/05 20:32
推 kotenka:謝謝大家的回應，第一次做clone就學到很多，我會繼續努力 05/05 22:06