推 abelee:其實直接用ETOH/NaoAC純化就可以做in vitro transcription 05/11 18:34
→ abelee:transcription效率並不會不好... 05/11 18:36
小弟用Phenol/Chloroform純化DNA有一陣子了
我先說我的實驗方式
將restriction enzyme作用過的30 ug DNA沉澱去鹽
再用proteinase K (100–200 ug/mL)及0.5% SDS
以50 ul體積在50度C下作用30分鐘
做用完後補水到200 ul
加入同體積的Phenol/Chloroform vortex 30s 靜置3 min
之後離心13000 g 4度C 15分鐘
離心後會有透明的水層跟黃色的有機層中間白白的是蛋白質
因為之後的實驗需要通常我都會做個兩三次去掉蛋白質那一層(就看不見白白的)
問題來了
剛離完心是透明的水層 會有微小泡泡從中間飄上來
感覺就像起霧一樣
但是將水層transfer到新的tube這樣的現象就會不見了
以前都沒有這樣情況過年後才有的
但是我之後的實驗也就做不出來了 XD
這個DNA我之後是要做 in vitro transcription的
以往的產量都很多 但是最近都做不出來
有神人可以幫幫小弟我嗎
感激不盡
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