推 liuse:是用Ni-resin抓的嗎? 是的話會抓一些有的沒的 05/18 01:21
→ shuyanc:我也覺得Ni NTA有時純化的雜protein有點多。 05/19 09:39
有人遇過嗎
我用 his bind resin純化protein後再跑SDS PAGE
發現elute下來的protein在約大個5kd左右的地方多了一個band
(不是2倍大小的dimer polymer之類的)
W: whole cell , C: cytosolic fraction , I:inclusion body fraction
P: urea 處理離心後pelle , E: elute fraction
M W C I P E
40kDa ─
─ ─ ˍ ▅ ▁ ← 哪裡來的
＿
▃ ▂ ← 哪裡來的
30kDa ＿ ─
▆ ▅ ▅ ▅ ← recombinant protein
─
明明whole cell fraction很清楚看到induction出來的protein
用urea溶解inclusion後尤其是純化後卻出現3個band
看起來好像是urea處理後不知道發生什麼事
但我之前處理過其他clone都沒遇過這個問題
而且它的size又比較大應該不是被protease digest掉
如果說是sample沒處理好
whole cell 部分也是很清楚的一條band
我已經想不出來問題出在哪裡??????
那兩個protein到底從哪裡生出來的????
有人遇過嗎????????? 幫個忙啊~~~~~ 感謝!!!!!!
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