→ abelee:沒人回答我自己答好了,原因出在bis 05/27 00:13
推 runpapa0520:dna要跑19:1喔! 05/31 09:22
因為要分離siRNA(20~23nt),所以配置了15%polyacrylamide gel/7M Urea ,
配方如下:
http://www.genetics.ucla.edu/labs/fan/Protocols_MicroRNA.htm
40% Acrylamide 18.75 mL
5x TBE Buffer 5 mL
dH20 10 mL
Urea 21 g
10% APS 400 ul
TEMED 40 ul total體積50ml
ps: Acrylamide我並沒有加bis-acrylamide
鑄完後1個小時左右,我去沒去跑膠,先拆膠起來看看gel是否有問題
拔玻璃片的時候就不是很好拔了,但用buffer濕潤後就可以順利的把玻璃片拔開,
但是gel卻整個都緊緊黏在白色的板上,感覺gel是有凝固,
但是....就是無法把他由白色的板上取出.gel是呈現一種很黏很黏的狀態,
用tip去戳它還會牽起絲來.... (￣□￣|||)a
我查了幾篇配製gel的文章,
有些Acrylamide會寫要加19:1的bis-acrylamide進去,但有些就不會特別著名要加.
而Urea從6M~8M的都有,至於10% APS與TEMED的量則各有個的喜好.
我算了一下這次用的配方,其實並沒有超出固定範圍內.
可以請教一下有配製過高濃度denaturing polyacrylamide-urea gels的先進們,
我的配方有錯誤的地方嗎?或者鑄這種gel最佳的配方大家都用多少比率呢?
先行感謝大家撥亢回答呀
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.225.200