[問題] E. coli表現純化完之後有GroEL

[ATKINS (ATKINS)]

我的cDNA是接在pET41上
上面有His tag和GST fusion
但是經過兩個affinity tag的chromatography純化之後
跑SDS-PAGE時發現除了我的target protein以外
就是有一個band一起存在   而且由SDS-PAGE看來量也不少
於是做in-gel digestion送MS之後
確認是GroEL   就是E. coli本身的chaperonin
這個protein就像我們所知的chaperone一樣會形成complex來幫助folding
找資料試了一些方法    像是加MgATP處理
不過看來效果都不是很好 @@
不知道有沒有人遇到過相同的問題可以一起分享一下嗎
像是該怎麼處理或怎麼分離之類的.....
謝謝~~^^

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◆ From: 140.113.184.123
推 wangba:兩個protein分子量差很多的話 可以試著用分子量離心分開
推 ATKINS:基本上它們是形成complex  所以分子篩會一起流出來 T_T
推 csardas:Hydrophobic Interaction chromatography or
→ csardas:Ammonium sulfate precipitation
推 ATKINS:感謝樓上的建議，希望實驗能成功 ^^