推 K587262:謝謝^^ 07/08 17:33
※ 引述《K587262 (風......何時再起)》之銘言：
: 請問板上的各位大大 有人做過利用RBL-2H3進行抗過敏的細胞模式嗎
: 實驗大致是利用anti-DNP IgE鍵結到RBL-2H3上的Fc receptor
: 爾後加入DNP-BSA與IgE進行cross linking引發肥大細胞去顆粒化的反應
: 但是我實驗怎麼作都無法誘導出細胞去顆粒化
: 利用cell lysis的確可以利用分光檢測出去顆粒化酵素的存在
: 所以我不知道問題出在哪 想請問板上是否有人也在研究相關的實驗
: 可以給我一點建議跟指導 謝謝
我用過BMMC做過 不過我是用loading IgE 之後用anti IgE 座crosslinking
不過我想使用DNP-BSA 來corsslinking specific IgE效果應該更好
想請問你測試的方法是啥??
1. Ca++ influx? 2. B-Hex 3. histamine release??
1.需要特殊的儀器 不過只要幾顆細胞就可以了
之前研究過了一下 後來就因為太懶惰所以沒做:P
我個人使用過的是2 and 3 2其實超快 兩個小時就搞定拿數據 又便宜
但是問題是 我的感覺是他不是linear的 而且每個lab處理程序不太一樣
導致% release其實很有問題 就是不同實驗室做出來的數據其實不太能比較
而且 我同一批樣品 測2漢3 計算出來的%就是有差阿
我看不懂你所說的degranulation enzyme存在是什麼??
是說b-Hex? 還是???????
我第一個想法是你的buffer是使用含有Ca 美離子的嗎 用DPBS應該是無效
因為degranulation需要有鈣離子存在 通常使用的就是tyroid buffer之類的
除了specific IgE之外 你可以用A23187/PMA Compound 48/80 來做control
對了ConA基本上就是人工corsslinking FceRI 也是可以用的
至少先找出 是assay出問題 還是他真的不會degradation
還有就是 有些細胞養太久 會lost FceRI expression
或者是impariment of FceRI signling
看到有人在做這題目真的覺的親切阿.....
雖然RBL不算mast cell....
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※ 編輯: cytospin 來自: 68.254.13.137 (07/08 14:03)