我最近做real time PCR
當初這個基因我已經用RT-PCR 做過了
想說用real time能更準確比較
結果 我卻跑不出結果 每次都是undetect
我一共用了兩種primer 一種是用primer3設計
一種是RTprimerDB這個網站提供的
可是兩個網站都呈現出一樣的結果--> undetect
而且他們的曲線長的很奇怪
都是在threshold以下 一直呈現鋸齒狀而有向上的趨勢
可是一直到40個cycle前都沒有衝過threshold
可是我的internal control GAPDH跑的很正常
所以排除機器或是材料的問題...
再說正常的曲線應該是會突然有暴衝幾乎直線通過threshold的感覺巴
請問有人有這種經驗嗎 這樣的 曲線 undetect 代表什麼情況呢???
請大家幫幫我~~~~~~~ 我已經重做快兩個月了 Q ____ Q
謝謝大家~~
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