Re: [問題]關於EMSA non-specific binding protein

[aggaci (徵鋼琴老師啦！)]

※ 引述《achihla (gg)》之銘言：
: 我的EMSA實驗的反應如下
: biotin-labeled probe:        20fmol
: poly(dI。dC)。poly(dI。dC)    1ug
: MgCl2                         5mM
: Tris                         10mM
: KCl                          50mM
: DTT                           1mM
: 得到的結果
: 有五個shift band 都無法被競爭掉
: 應該是non-specific binding protein
: 請問大家再做EMSA時，也會有這麼多non-specific binding protein嗎?

  你的意思是否是說shift無法被自己的cold probe競爭掉？

  是否有pre-run...?

  我剛做EMSA時沒有pre-run就會有這種現象



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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.114.100.165
推 achihla:有的shift可以被競爭掉 但有的不行，可是我也有pre-run
→ achihla:pre-run 50V 1hr30min
推 aggaci:請問競爭倍數？競爭是哪一種？
推 achihla:我是用specific cold probe 200X去競爭
推 aggaci:歹勢，我沒這種情形，你就針對有被競爭掉的shift去研究吧
推 achihla:感謝感謝!!