Re: [求救] 植物DNA的萃取

[buterscotch (##)]

※ 引述《dankai (改變心態...衝!)》之銘言：
: 1.你在把研磨好的植物材料放到CTAB時,可能潮解到 (我初期做實驗時有發生過)
: 2.會不會你的植物材料的次級代謝物太多,遮光不足等 (像我的材料會額外加入PVPP)
: 3.水浴的時間....我是不清楚你是看paper還是前人留下來的方法...我是覺得煮太久了
我常常煮整晚，都不會怎樣，應該沒關係喔。
: 4.我建議你再第7步驟後再細純化一次利用phenol與chloroform...
:   因為我覺得你這個純化方法算是粗純化而已...在最後的DNA中仍存在許多雜質~如蛋白質
: 5.（tip可切斜口）<-----這個步驟很危險...原本滅菌好的tip..可能切的動作污染!
可以買本來就切好的tip，也可以先切好再去滅菌囉。
: 6.你可以將RNase作用時間再延長至1個小時...讓他充分作用
: 7.我想最終還是你的TE buffer是不是已經污染等等~
: 其實再第一次TE buffer溶完時,就可以先跑一次電泳...
: 如果這時候已經smear就知道之前步驟出出問題了
可以去買extract DNA用的kit來試試看，如果kit出來沒問題，
就可能是純化不完全，
如果出來有問題，可能就是處理太粗暴。
我個人比較傾向認為處理太粗暴或是磨葉子的時候沒有讓葉子保持低溫，
所以造成DNA degradation。

:)

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 124.187.109.124
推 dankai:是喔..煮整晚~ 過去學長都叫我們不要煮太久..以免煮出亂七
→ dankai:八遭的東西...其實做的出來最重要!!XDDD 大家加油~
推 buterscotch:我覺得做實驗最要學的秘技之一就是：要知道哪個環節
→ buterscotch:適合吃飯，哪個環節適合回家睡覺。（眺望遠山）
推 gracie:70%EtOH可以多洗幾次  磨的過程中怕潮解的話  研缽先預冷
→ gracie:在液態氮快全部揮發之前  要趕快再加入液態氮...