推 boyo:可能切太久了 BamHI我記得有Star Activity 放太久會開始亂切 09/22 07:19
推 Crow22312:用別的東西切切看出問題的 plasmid, 如果別的東西正常, 09/22 13:17
推 microball:有時候enzyme放久了會開始亂切 可以試別管 BamHI看看 09/23 19:06
對不起為了標題長度限制只好打那麼聳動的鳥標題...
我想問的是，最進在切兩個不同的 plasmid, 一個用 EcoR1 一個用 BamH1
不是 double digestion 喔 是各用一個 RE 切而已
兩個 digestion 當然是一起作的
除了enzymes and buffers 以外從RE digestion 到沉澱回溶都用一樣的材料與器材
最後跑膠的結果卻發現用 BamH1 切的那個整個糊掉
變成一灘 250-100bp 之間的 smear
EcoR1 切的那個倒很成功 當然原本的 plasmid 也沒什麼問題
想問問大家對此有何建議？
我 BamH1 沒有用專門的 buffer
（只用 new england biolab 的二號 buffer, 就表上來說百分之百相容）
也沒有加 BSA
這會是造成 nonspecific digestion 的原因嗎？
--
And my soul from out that shadow that lies floating on the floor
在那地板上浮動的影子中的我的靈魂
Shall be lifted- nevermore!
將永不再起...
--The Raven by E.A.Poe
--
※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: 129.22.124.232