推 HCCY:你的control呢? 10/28 18:08
推 driws:purify過的抗體會比較專一 認到的雜band比較少 10/29 00:41
→ driws:二抗用太多也是會增加多餘background的機會 10/29 00:43
請問western blot中secondary antibody使用過多
會造成許多的bnad嗎?
因為我是第一次用這個secondary antibody(sigma的anti-rabbit IgG HRP)
一時找不到手冊又很趕的情形下..
不加思索的使用1:10000的稀釋下去做...
結果後來才想到網路上就能找了= =
結果說明手冊說建議1:160000...哇靠..整整差了10倍
沖片出來的結果也很怪
好像..band有點多..
(不過這次用的primary antibody..lab中學長沒有使用成功過..也就是用了沒有band出來)
我還滿害怕我的結果會不會是因為我secondary antibody過多造成的...
還有..做回來的antibody的specific都大概會是怎麼樣..
因為之前大多做的是直接買的(GST..His-tag等)
這次做的是由前人純化的protein去打兔子出來的
拿到是一整管類似血的東西(應該是血吧..)
這樣做的specific會不會有影響?
還有..要是我真的secondary antibody用太多
除了重做以外還有救嗎= =..
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.57.139