※ 引述《thewholeshit.bbs@ptt.cc (e04)》之銘言:
> 如題
> 因為抽出來的DNA不純
> 用OD值去測的結果非常不理想
> 跑膠後因為有smear的情形
> 所以也無法直接和marker比較
> 聽說image j這個軟體可以做這個分析
> 但是下載之後我卻不會用
> 做到三條lane plot之後就卡住了
> 有沒有人可以告訴我詳細的分析方法
> (e.g 按a鍵--按b鍵...)
> 謝謝
個人主觀上認為 smear 太嚴重神也救不了你
另外用影像定量在準確性上本有一定的限制
個人的做法是 先要跑一張用各種已知濃度的 DNA 跑的 gel
照下來轉灰階(通常 8bit, 256 階就夠了)
放 imageJ 裡面作 calibrate(calibrate 詳細做法請查線上說明)
然後開你要測量的檔案
先 subtract background
(同樣,詳細做法查線上,不過我擔心 smear 很嚴重的時候 background 會去不掉)
然後框起你要測的 gel 上面你認為可能是 signal 的部分
measure 他的 integrated density(記得在 set measurements 裡面勾選先)
如果你 calibrate 有作對的話
會出現一個新視窗裡面就有測出的量了
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