[求救] FLAG抗體

[Nikio (工作有夠忙)]

我在做FLAG-tag的蛋白質實驗
實驗大致如下

實驗組：有個PROTEIN帶FLAG, whole cell lysate
control組：一樣的細胞，不過沒有PROTEIN帶FLAG

先用FLAG affinity beads做IP

wash過7遍後拿BEADS去煮

之後做western

用的抗體是Sigma M2 monoclone antibody
很鳥
染出來一堆bands
連negative control也一堆(有用affinity column先抓耶@@)

有在GOOGLE查到國外論壇也很多人碰到相同問題
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/13665.html

有人碰到類似問題嗎？要怎麼解決？感恩 ><

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 59.126.12.63
推 blence:sigma M2的Ig濃度太高,不小心使用很容易就會這樣
推 leoblack:你的flag beads上面的Ab是不是也是mouse的?!
→ leoblack:不曉得你的一堆band是不是heavy/light chain~
推 Nikio:flag beads上也是M2 abs, 老鼠的，我SAMPLE是人的細胞
→ Nikio:heavy/light chain會有一堆嗎@@ 不是只有兩條喔 ><?
推 konlon:請於煮sample時於sample中加入1-1.5ul之1M DTT 可改善
→ konlon:因為IP及WB 1抗 同一Species之Ab所造成之heavy/light chain
→ konlon:可以試試看  很好用  但若要看的蛋白不能是25 or 50kD
→ Nikio:我實驗不能用DTT耶(Orz)