作者bluehttp (蝦毀)
看板Biotech
標題[求救] cloning 救郎喔~~
時間Wed Dec 12 01:17:25 2007
最近在做cloning,
做到快發瘋了.
我用 XhoI 及 Hind III (biolabs),
去切 insert 和 vector,
跑電泳也確定有切動,
之後用T4 DNA ligase 進行 ligation, 然後overnight,
隔天再transform (DH5a),recovery 1hr,塗plate, overnight.
可是隔天來看沒有長.....
我有試過用 fermentas 的 ligase 及 biolabs 的 ligase,
可是一樣都沒長,
不知道尚有哪些細節我沒注意到,
希望有經驗的大大可以幫助我阿!
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花這麼多時間作實驗 一樣 "no data"
林北黑掉了..........凸>"<凸
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◆ From: 123.192.24.108
推 ldy:抗生素的比例是否過高? 12/12 01:21
→ bluehttp:amp 60ug/ml 且我有用沒切的plasmid做transform有長 12/12 01:24
推 slowmove:ligation condition? temp? 12/12 12:31
推 littleable:可以試試看ligationn三天...應該就會長幾顆了... 12/12 13:34
推 doctorHyde:可以問…transform完的菌液有全部塗完嗎？ 12/12 13:44
→ bluehttp:ligation 有試過 16度和室溫 12/12 19:52