[求救] Ni-NTA純化His-tag fusion protein的問題

[bluecsky (我要藍藍淡淡的天空)]

我是買Qiagen的Ni-NTA的resin來純化

用Batch purification

使用的wash buffer有三個

分別含有20 50 80 mM的Imidazole

每次都洗4倍column體積的量

現在的問題是在於..

我純化完後取一點來跑PAGE

發現最後的elution fraction的protein

還是沒有我想像中的純..就是除了主要的band以外在上下還有一些小雜band

不過雜band沒有很明顯..但是還是看得出有band

請問我要怎麼增進我純化的純度呢?..

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上帝曾經說過 :
        當一個人打你右臉的時候
                        你就要用日耳曼背橋摔壞它的左臉

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 220.137.56.129
推 aggaci:減少resin的量
推 liuse:很正常.....用His-tag系統純化會比較髒一點點
推 wensing:請教一樓...  為什麼？
推 simonmiho:一樓的目的是想讓resin saturation..這樣的話雜band減少
→ simonmiho:且Qiagen的NI-NTA我記得1 c.c有十個mg以上的binding量
→ simonmiho:應該對吧...aggaci學長??   ^_^