推 hongdow:那我還有個問題想請問B大,因為實驗室使用的BCA kitv需要 01/07 18:14
→ hongdow:需要在37度下反應2小時,我們不是使用跑膠的方法> < 01/07 18:16
※ 引述《hongdow (紅豆)》之銘言：
: 各位前輩好...
: 小弟第一次要自己配溶液.
: 諸多地方不是很懂..
: 而目前遇到一個問題是..
: 配方中 有一個成分是PMSF(Phenylmethylsulfonyl fluoride)
這是 protease inhibitor
板友有提到，Roche 的藥丸似乎比較穩定，而且是多種
inhibitor 的配方。有點貴就是了。
如果實驗室只有 PMSF 那也無所謂啦。那就現配吧。
: 但我的參考資料有提到此成分在水溶液中極不穩定,半生期只有30分鐘
: 但算一算,在步驟刮下細胞,溶解細胞,反應,就快超過30分鐘,而且我們實驗室買的
: BCA kit也要反應2小時,那這樣PMSF是不是就失去它的功用啦....那該如何解決勒??
前面說了，PMSF 是要防止你萃取出來的蛋白質被降解用的。
你測蛋白質不會把所有溶液都拿去測吧 = =
其他冰在冰上沒那麼容易壞。
我的經驗是加 protease inhibitor 在破細胞那一剎那是比較重要。
之後影響相對較小，存一下下也無不可，當然不同的樣本特性不同。
: 希望前輩多給一些建議.....THX^^
其實這裏有個小問題，就是，別人寫的不要盡信。
如果有時間，實驗室經費又允許，樣本也不會太珍貴的話。
(好像太多前提)
自己試試看到底多久會沒效不也蠻好的。
每個時間點收一點來跑膠，看哪時候真的會 smear (蛋白質被分解)。
說不定用你的細胞，你的系統，PMSF 沒那麼不穩定呢？
實驗的東西沒人說得準，自己做最實在。
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