最近使用HSP90 inhibitor treat細胞
早在02年的時候就有人發表過同樣的實驗
我是用同樣的濃度測試的
結果發現很詭異的結果
1. treat細胞1uM 24 hour然後做BrDU proliferation 測試, 數值與control同
表示細胞沒死?
2. treat細胞24 hour 1uM 然後測casepase3/7活性 signficant increased
表示細胞開始死了?? caspase活性是用化學法(就是substrate輩切割之後會放螢光)
3. treat細胞2-6小時 target protein downregulated 這符合期望 (flow cytometry)
但是詭異的是......24小時的時候恢復表現
這表示 細胞把inhibitor給排出了???
4. treat二十四小時的細胞測Annexin V and PI stain
大概有20-40%的細胞快死或者死了....
5. treat細胞24小時, 做total protein western....target protein 完整無缺阿
可是測試PARP, 沒有被切 是intact的
這下可好了
到底是有死還是沒有死??
我個人的想法 : treat細胞之後, 細胞有些喪失target protein所以開始死
可是細胞有resistant pump 把藥物排出所以24小時後target protein又回來
所以rebound的狀況下 雖然細胞之前有死可是還是恢復過來了
這就為啥我可以測到caspase活性 還有annexin V and subG1 area
可是rebound的後果我看到total protein相同
BrdU proliferation assay也相同
這個推論合理嗎
還是有其他的idea
再02年的paper並沒有看到這個情形
24 hour所有的target protein全部degrade了
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