[求救] Western怪怪說

[Nikio (工作有夠忙)]

想請教大家一些問題 ><

    今天壓western很怪，五分鐘、十分鐘 都一片空白，就狠下心給他壓了3小時，
結果整片MEMBRANE都黑了，但跑出了一堆一條條白色的bands，好像位置又是我要的
protein @@ 見鬼，怎麼變成白色的呢？ 對了 連marker也變成白色的

   和同學討論結果可能是：二抗太強，把ECL在壓片前就吃光光，可以解釋為何第一次壓
沒壓出來但長時間壓卻變白色的（被HRP吃掉以致於正確位置的protein無法顯色）
   不過好怪喔～如果說是我要target的protein還解釋的通，為何pre-stain也變白的@@?

另外想請教大家：
如果壓不好，壓不出東西，或挑錯壓片的時間點，再加ECL去壓還壓的出來嗎？
很懷疑在membrane上的HRP是不是真的還能用？

因為我之前做ELISA有種經驗，就是不小心錯過顯色時間，沒測到linear OD的範圍，
想說：好吧！反正enzyme還是在盤子上，應該還有用，結果加下去就不呈色了！不然就是
呈色的時間拉長，或是沒辦法變的跟第一次加的時候一樣強..大家有這種經驗嗎？

小好奇～就是像這些顯色的enzyme，是不是作用後之後就失效，或是大幅降低酵素能
力了呢？

感恩 ><

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 211.76.175.170
推 naturer:曝光過度
推 a64toto:時效過完加再多也沒用喔
→ a64toto:可以把ECL跟抗體洗掉重新來一次
推 rrttyy6:http://myurl.com.tw/bm7u
推 changyaowen:白band通常是太強造成反白 不過壓久才出現 需要擔心是
→ changyaowen:是非專一性出現的band 不然應該一開始就壓得出來
→ changyaowen:專一性的band應該只會出現一條 短時間>黑 長時間>白
推 ralphlee:壓片時間太久了 以秒為單位試試看 用個10秒20秒~~