※ 引述《shonshonGie (＄７５)》之銘言：
: (先說我操作的NF-kB的EMSA實驗,使用的是panomics的kit)
: 加入cold probe與hot probe競爭後,
: 為何原有的band消失的話,就是specific binding呢?
"可能"是specific binding
也就是說這段序列可能有你預測的TF consensus binding site
我會說可能是因為此shift被競爭掉也許是因為cold probe其他的序列所造成
而不是你預期的那個consensus binding site
: 如果這是non-specific binding,加入cold probe不是也有band消失的可能嗎?
可能 當你加到1000-10K倍時可能會發生
但50-200倍不太可能有這種情形
: 還是前提是:此probe與真正binding的位置有最好的specificity,
: 所以先消失的band是真正signal
: 但是之前學姐教我時說,cold probe要盡量加到使band都消失
我想他說的是cold probe和labeled probe是同一種序列
: 這不就是人工導致的結果?
不全然是 你誤解了
: 還是加入cold probe做為control另有原因??
positive control or negative control
: 我一直想不通,還被老闆給問倒了>_<, 煩請板上各位指導指導囉 謝謝^_^
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