推 dankai:太感謝你了~目前我正在測試!!^^~ 02/28 00:44
※ 引述《dankai (冷泡茶)》之銘言：
: 各位前輩好
: 小弟實驗室目前在做植物蛋白質體的相關實驗
: 基本的total protein 利用phenol都可以抽的出來
: 跑出來的2-D效果也不錯!
: 而目前要針對特定的植物組織抽取膜蛋白
: 參考許多篇paper大多都是提高extraction buffer的鹽濃度
: 再來就是利用kit 或其他設備
: 而我們實驗室都是利用傳統萃取方法沒在使用kit
: 請問各位前輩是否有這方面的應用!!
: 可以指教小弟一下或再叫我看某篇paper都可以
: 謝謝 ^^
: 祝大家實驗都順利 元宵節快樂
sucrose gradient 分離
基本上最少要有一台懸吊式的超高速離心機才能進行實驗
首先就是要泡好各式不同濃度的sucrose溶液
如果有蠕動PUMP的話，依照濃度低到高分別的送入離心管的底部
當然這個過程最好全程在冰中進行，分層的效果會比較好
做出來的結果也會比較佳
至於超高速離心機要精準balance的部份就不說了
如果沒有蠕動PUMP的話
也有個偷懶的方式
就是依照溶液濃度的高到低
(反過來囉，忘了結果就會很囧)，
分次加入離心管中
每加入一次，就送進-20度的冰箱冷凍
最後也可以有分層的效果
當時作genomic library時有用過
如果有需要再跟我聯絡吧
因為詳細的步驟要翻箱倒櫃才能重現天日了
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