推 Locutus:請問這樣做的理由是什麼? 因為我也有類似的問題 03/21 00:46
※ 引述《kvw (Je t'aime)》之銘言：
: 最近在做cloning
: 所要insert進去的片段大概是1700 bp
: 所使用的是p-GEMT easy vector
: 前面都很順利
: 後來挑了white colony
: 抽plasmid後 用PCR做confirm(老闆說這樣比較省錢)
: 結果出來 完全沒有insert
: 初步排除是X-Gal出問題
: 因為有藍有白還蠻多的
: 而其他inser進去的片段是400 bp的都成功
: 唯獨這個大片段的 挑了快20個white colony都沒有insert進去
: 有沒有人遇到這樣的情形 拜託幫幫忙
請問你的colony有沒有大顆小顆不均勻的情形？
你可以試試把plate的抗生素濃度降低(e.g. 25 amp)，放在室溫培養，2~3天，或許..
挑小顆的colony就可以拿到你要的construct了。
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