[求救] western 轉印的問題

[xyz0319 (你今天yanzi了嗎)]

各位晚安
我最近在做western,但是常常在transfer這一步有問題
每次都會跑過頭(PVDF上的某些地方變的有點透明),然後看不到MARKER

我試過幾個參數
125mA跑overnight(放4度C冰箱)
80mA跑overnight(放4度C冰箱)
250mA跑兩小時(放室溫,但是周圍有用冰磚圍著)
而且在轉印槽裡面,都有放專用的冰盒

但是每次都會有一樣的問題,也不知道是哪邊出問題

今天有人建議說用120V跑30分鐘試試看

不知道版上的各位有什麼建議呢?
謝謝 感激不盡

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.113.21.135
推 LIAR:請問PVDF跑過頭會透明啊？
→ LIAR:另外不是要看面積換算電流嗎？我們是1.5mA/cm2
推 bluecsky:是可以算啦不過一般都會偷懶的XD..
→ bluecsky:你的參數設定都跑太久了啦..overnight就用10V就夠了
→ bluecsky:250mA頂多一個小時左右..當然跟你目標的protein大小有關
推 silverberry:我們家 6*9 cm2 的 29 mA 4 度跑 overnight
→ silverberry:400 mA 就跑 1 小時~ SDS-PAGE 12.5% 上的 marker
→ silverberry:除了有的時候最大的還會有點殘留外 幾乎都會留在膜上~
→ silverberry:另外我們家是 BIO-RAD 的~~ 給你參考囉^^
→ xyz0319:非常非常感謝樓上各位大大...我們家也是BIO-RAD的^^
推 cytospin:請問你放PVDF membrane之前有用methanol浸濕嗎?
→ cytospin:看你那症狀還挺像我們labmate最近出的狀況...
→ xyz0319:有耶~methanol大概20秒..然後mili-q water兩分鐘..然後在
→ xyz0319:transfer buffer中balence五分鐘(是參照hand book的)