Re: [問題] 請問製作knockout mice 通常都多久？

[boyo (29大頭)]

※ 引述《biolancer (Incomplete....)》之銘言：
:        如題，好奇想知道台灣會作knockout mice的實驗室比率有多少？
:        若從養小老鼠到真正製作，時間大概多久？
:        (以前有聽說最少要半年 不知現在有沒有好一點)
:        會不會因為要剔除的基因不同而製作時間不同呢？
:        感謝大家解惑了～

忘記回答你問題了  抱歉
knock out老鼠要做出來分成幾個階段

第一個階段你要先做homologous recombinate DNA construct
就是一長段DNA序列  跟你要剔除的基因非常接近  只是少了一個或幾個Exon
這個大概要三個月左右

第二個階段要做Gene Targeting
把前一個階段作好的construct 電到 mouse ES cell裡面
接著用不同的antibiotics做正負selection
這個要一個月左右

第三個階段是做southern screening
就是把前一個階段的 ES clone做進一步的篩選
從設計probe  做membrane 到完成3'端與5'端的screening
大概也要一個月

第四個階段是做 Cre or FLP transfection
這會看研究者的需求是要看全身的剔除或是只有特定tissue來做
大概要一個月

第五  最後則是把"正確的"ES clone拿去打blastocyst
B6的孕期大改是在23天左右
技術好的話一個月就可以拿到Chimera

扣掉實驗會有失敗以及困難的部份  大概就一年左右可以拿到chimera
其實每個階段的實驗還有很多細節與變化

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              如果孔子是那待沽的玉
              我便是待斟的酒
              用一生的時間  蘊釀自己的濃度
              只為等待剎那的傾注

                                         張曉風  釀酒的理由

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◆ From: 59.120.15.179
推 freesoul:一年就拿到老鼠絕對是運氣很好都沒出錯才有可能
→ freesoul:話說我實驗室一個postdoc的老鼠就弄了快兩年....
推 HIbaby:看基因喔, 有個學長KO了數個基因 很快很準.
→ HIbaby:但是從別人那邊接手一個別人做不出來的gene.
→ HIbaby:結果他也弄不出來..Orz.  所以有些因素可能目前還不清楚
→ biolancer:恩~原來基因也是影響的一部份 我還以為技術差不多 謝謝~