[求救] real time PCR 跑不出來

[xyz0319 (你今天yanzi了嗎)]

板上各位大大好
我最近在跑real time pcr,但是一直卡在primer的問題
我是用DNA star跟NTI兩個軟體交叉確認primer的優劣度
但是再跑real time時,同一個sample不是跑不出來,就是Ct值差很多(我做三重複)

而在Tm設定方面,我按照軟體建議的Tm值以及合primer公司給的建議值,各做一次
但是一直有前述的問題...而control組的都有跑出來
搞得目前我不知道該從哪邊去著手了@@

有哪位大大可以給我一點建議嗎? 謝謝


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.113.21.135
推 qqo8855436:sample 品質有在水準上嗎???
→ xyz0319:沒有非常好...但是OK,只是濃度沒有很高,但是其他PRIMER都
→ xyz0319:有跑出來...我有懷疑過會不會是濃度太低
推 qqo8855436:你先用一般machine 有run出來嗎??
→ qqo8855436:沒有非常好是怎樣?? 你是RNA or DNA??
→ qqo8855436:您得機型是??
推 jsi:最近我也遇到類似情況 後來是用Biorad機器進行gradient
→ jsi:annealing temp去找尋可以作用的溫度 發現適用溫度比預期少了
→ jsi:8度 或許你可以參考看看
→ xyz0319:嗯嗯  謝謝^^