[求救] 關於western blotting時觀測phospho protein的問題

[lail (逃避不是辦法阿)]

前面看到有板有在推文中提到
western要辨認磷酸化蛋白質時
比較不建議用脫脂牛奶blocking
建議用BSA blocking

剛好最近我也在看不同的磷酸化蛋白質
其中我觀察的p-JNK訊號非常弱
雖然我要比較的差異一直存在
但是整體而言訊號弱到我需要一抗二抗濃度加強
二抗作用時間也需要加長
這樣的現象會是因為我用脫脂牛奶blocking有關嗎?
我若改用BSA blocking會改善嗎?

另外,使用的BSA是用哪種溶劑泡呢(1X TBS? TBST?)
謝謝^^

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 218.165.87.227
推 tsubasawolfy:我用過的都建議TBST 還有用BSA blocking時間要加長
→ tsubasawolfy:加長是因為BSA貼附能力沒牛奶好(trouble shooting寫)
→ tsubasawolfy:實際上嘗試過RT 1hr.2hr.3hr  4度O/N...RT2hr後效果
→ tsubasawolfy:看起來都一樣　(不過這也要看你Ab去抓條件￣▽￣||)
推 blence:我用過invitrogen的phosphoprotein staining染這些BSA,更是
→ blence:充滿磷酸化,所以casein被磷酸化而不適用的理由不見的成立
→ blence:我覺得用改變non-fat的condition比換BSA來得有效
推 C5566S:my sugestion is TBS-T 0.1%