※ 引述《hungte0928 (Damon)》之銘言：
: 現在都在進行蛋白質純化的進度
: 可是binding到我要的protein少之又少= =
: 這讓我很困擾
: 我的作法是先將我要看的序列轉到BL21上面
: 利用它大量產生protein
: 養好小量後lysate
: 用sepharosre去binding我要的fusion protein
: 用PBS洗了幾次後再用elution buffer
: 從beads上洗下來我要的
: 可是每次跑SDS-PAGE都看不到我要的band.....救命ㄚ= =
: 有人有更好的方法可以告訴我嗎??
: 或者要注意的地方~~~感恩阿!!!
: p.s.是不是在buffer裡加DTT會比較好一點@@
先確定你的蛋白質是否有被induction
可以養小量後，直接用1X sample buffer lyase 95度去煮
之後跑sds-PAGE 看是否有你要的蛋白質。說不定你的表現量跟本就很少
當然你在純化時，還會損失所以就看不到了。
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