Re: [求救] 請問有關於FRET

[microball (無華之果)]

: 我本身有兩個PROTEIN,
: 各接在不同的螢光蛋白上,
: 一個會發綠光,
: 一個會發紅光,
: 想看看這兩個蛋白是否會colocalization,
: 想學用顯微鏡做FRET...
我們實驗室做過的是 CFP/YFP FRET
我知道現在紅綠可以做 FRET，但是你可以要查查看你的螢光蛋白效率夠不夠好~~

: 可是問過系上老師(荷蘭人),他BRALA BRALA講了一堆,
: 結果好像被陰掉了(居然被拿去試他自己和其他老師的project,根本不想幫我)
: 雖然心有不甘,
: 可是也沒辦法,他是管學校顯微鏡的老師..
: 請問這個實驗是只有軟體部分比較難還是連顯微鏡都很特殊,都很難用??

基本上 FRET 是個相對簡單的實驗
只要能做 photo bleach，就算在普通螢光顯微鏡也可以做，也不需要活體。

: 他跟我拿了original images (當初做cotransfection在螢光顯微鏡下的照片),
: 說要做signal 比較之類的,
: 後來也沒下文....
: 另外一問,FRET可以用FIXED 玻片看嗎??
: 因為他也只跟我要玻片,
: 他們自己是用LIVE CELL在萊卡的顯微鏡下做FRET~>_<~
: 請問板上有人可以幫幫我解答這些問題嗎??
: 被當笨蛋耍的感覺真不好受@@

我建議你要有 positive control：
(1) 你可以 construct 一些已知會有 physical interaction 的蛋白
(2) 或是你可以做個 綠-紅 螢光 fusion protein，這更直接


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這是你嗎  你要這樣的過嗎
      這是你嗎  你錯過了自己吧
            就這樣嗎  把你自己信仰  來換別人所謂的天堂
                  這是你嗎  是誰給了你框框
                      這是你嗎  把你自己都遺忘
                             你的心   畢竟是你自己的地方

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◆ From: 140.109.32.9
推 oplz:有 intereaction 不一定會產生 FRET, 如果你仔細看式子, 裡面
→ oplz:有一項參數是角度..到目前為止還沒有辦法有效預測..所以就算
→ oplz:距離很近 也不能保證就會發生 FRET
→ microball:yah, FRET is tricky, but in many case it works
→ microball:there is a FRET screening paper on this week Science
→ dakota:本文說的沒錯就是你兩種螢光蛋白都必須夠亮 這樣結果比較好
推 lstlst:看到樓上的討論,看來還是乖乖做好IP><"
→ lstlst:還要趕快去找樓上說的PAPER來瞧瞧