Re: [求救] 想請問測posttranslational modificati …

[puec2 (^^y)]

※ 引述《ycmi (you can make it)》之銘言：
:   想問欲利用wetern blot去測某protein的posttranslational modification，例：
:   phophorylation or acetylation...etc.時，在收lysate或處理sample時，不知有
:   經驗的前輩們對於這個步驟是否該注意些什麼事情？例如，要避免什麼動作或應該
:   做什麼動作or加什麼lysis buffer等，才可以容易看到modification？或是才不會破
:   壞我想要看的現象？謝謝！ :)

acetylation我不清楚，如果是要看phosphorylation，lysis buffer裡面要加
protease inhibitor, phosphatase inhibitor 像是 sodium vanadate,
PMSF, antipain.....等。當然準備的過程全程放冰上是需要的，不過煮完以後
就不要放冰上了，不然sds會沈澱。


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◆ From: 61.56.130.95
推 blence:拼錯了,是phosphatase, 常有的PPaseI有NaF, Na3VO4, b-gly
→ blence:或上網找PPase inhibitor cocktail,許多公司有,但是比較貴
→ blence:acetylation可用Sodium Butyrate(NaB)或TSA等,前者常用便宜
推 liuse:當天準備完當天跑   要冰要冰-80
※ 編輯: puec2           來自: 61.56.130.95         (06/20 18:47)
推 ycmi:如果已經用super lysis buffer收，還需要inhibitor嗎？Thx!:)