作者lorna184 (小宛)
看板Biotech
標題Re: [求救] p-Akt
時間Fri Jul 4 15:10:59 2008
>推 lail:1抗濃度增加,再不行就試看看2抗o/n(濃度不變),參考參考囉^^ 07/04 12:34
>推 konlon:用用MILLIPORE的ECL市試試看 07/04 12:56
>推 tsubasawolfy:protein怎麼收的? 07/04 13:54
我是從fresh blood分離neutrophils,和刺激劑處理過細胞後,
離心,接著加入lysis buffer後,離心取上清液使用.
請問,會是我的sample製作的過程有問題嗎??
>推 adagoddess:一抗 (1:500) over night,隔天回溫久一點(2hr) 07/04 14:16
>→ adagoddess:Wash時間次數減少，二抗上久一點(2hr)。試試看吧 07/04 14:18
>推 liuse:你load多少protein 太少不行的 cell-type也有差 07/04 14:21
>→ liuse:cell signalling賣的很好用阿 我們這邊也常用
我load 20 ug的protein
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◆ From: 163.25.108.117
推 tsubasawolfy:lysis完後sonication會更好ˊˇˋ 07/04 15:35
→ lorna184:我有sonnicate 20w, 3sec, cycle 最小 07/04 15:38
推 tsubasawolfy:那phosphatase inhibitor也有加@@? 07/04 15:40
→ lorna184:恩恩...加了PMSF和兩種sigma賣的cocktail 07/04 16:14
推 adagoddess:增加protein的量試試看，20ug我個人認為不夠， 07/04 19:33
→ adagoddess:尤其又是壓磷酸化的東西，多辛苦試試看吧～ 07/04 19:34
推 liuse:用30ug試試看 然後壓久一點 07/04 23:27