Re: [討論] 關於Annexin V

[tsubasawolfy (悠久の翼)]

※ 引述《DarkBANG (波希米亞狂想曲)》之銘言：
: ※ 引述《linwei (我會好好加油^^)》之銘言：
: : 請問
: : 這樣我可以解釋為  細胞都已經壞死
: : 因此annexin V 無法染上嗎？
: 不行...necrosis的細胞爆掉膜也是會外翻的
: 所以necrosis也會是Annexin V+
: 從圖來看我會建議你gate的範圍往左邊一些
: 或是先去gate FSC和SSC的去除左下那群再畫
: (個人認為...FLOW的gate範圍是一門藝術....XD)
同時畫gate也是很黑暗的自由心證 科科

只能說要憑著良心做

: : 但是我又有查一些paper
: : 他們是利用Annexin V 與 PI 雙染的方式
: : 有染上annexin V 與 PI 的表示為壞死的細胞
: : 這樣表示說壞死的細胞annexin V 還是可以染阿?!
: 最好先了解一下Annexin V和PI的染色原理
: 然後想一下apoptosis和necrosis如何區分
: 這樣你就會知道為什麼你的解釋是行不通的

這是幾個月前有人present看不懂 所以打成word解釋

至於要如何調gate ...這種東西很難紙上說明= =a

要鞭可以鞭大力點= =a

───────────────────────────────────────
隨便Google到的圖
http://bioop.com/upimg/allimg/20061019/1055340.jpg


利用Annexin V  and PI stain偵測apoptosis

原理:
1.細胞初期apoptosis時 細胞膜中的PS(phosphatidyserine)會由細胞膜內側外翻至細胞\
膜外側
2.Annexin V蛋白對PS具有高度親合性
利用以上兩點在annexin V上面接上螢光物質 就可以偵測細胞是否有spoptosis現象


圖表解說


  Y軸 染PI
  │      │
  │      │
  │      │
＋│      │
  ├───┼─────
  │      │
－│      │
  │      │
  └───┴─────X軸  染Annexin V

   －       ＋



把PI跟Annexin V一起染

-(Negative)區域代表沒有螢光訊號 也就是沒有PI或者annexin V附著
+(positive)區域代表有螢光訊號


所以上面那張圖可以更詳細分為四個區域


左下: PI跟Annexin V皆沒有訊號
      通常這代表正常細胞
      因為細胞膜沒有破裂PI無法進入染細胞核
      PS也沒有外翻 所以annexinV也無法附著 也就沒有訊號


右下: PI沒有訊號 但Annexin V有訊號
      這區代表開始apoptosis的細胞
      因為才剛開始 細胞膜還沒完全破裂 所以PI進不去
      但PS已外翻到細胞外膜 所以會有Annexin V訊號


右上: PI跟Annexin V都有訊號
      這區代表apoptosis末期的細胞
      因為到了apoptosis末期 細胞膜破裂 PI可以進入染細胞核
      同時PS也外翻到細胞膜外

左上: PI有訊號 annexin V沒有訊號
      通常這區為necrosis (這是通常的說法 也有可能是雜訊)
      因為細胞急速被破壞來不及或無法啟動apoptosis機制
      細胞膜會被破壞(外力或者化學物質) PI可以偵測到
      但PS一樣還留在膜內 所以annexin V無法偵測到

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Wenn "Liebe" heißt,dieses Versprechen bis zum Tode        ▎◥ ◥       ◣   
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 163.15.174.201
推 jazzdevil:推 詳細圖解
推 nzj:讚 又長了知識
推 DarkBANG:推詳細的原理
→ DarkBANG:不過還是要說一下...第二象限的區域並不能區分出necrosis
→ DarkBANG:和apoptosis晚期的細胞
→ DarkBANG:necrosis的細胞膜被破壞PI會進去annexin V同樣也會進去
→ DarkBANG:至於第四象限通常是necrosis細胞爆掉噴出來的DNA
推 crement:所以FSC/SSC要gate好，不要GATE到這種debris