[方法] ligation的問題...

[dreamysky (新綠園說不關了)]

我有一段要接進去的gene 大小約1K

可是他的前後接位都是EcoR1

vector 我有加CIAP 作用 37度 30 min

ligation volume控制在20 ul

mol為 Vector: 0.7 pmol
       gene : 6   pmol

2 unit T4 ligase (genemark)

可是接不進去...

有請先進幫幫我...

我已經失敗兩週了...

PLEASE

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 192.192.90.35
推 enisx:我都做5 uL而耶... 16 度  overnight
推 dankai:試試看overnight!  還有genemark的ligase我認為效率不太高~
→ dankai:跟promega比起來~我比較喜歡用promega~~呵!
推 veltine:看看ligation buffer有沒有沉澱…另外加ATP試試看…
推 feng760804:OVERNIGHT+1
推 ookubo:請問一下 你的接不進去 是怎樣判定的？
→ blueashin:兩周兒已= ="" 話說一開始我失敗了兩個月