借標題順便問
我之前是從細胞的染色體DNA當作模板做PCR
我使用Takara Ex Taq可以得到產物
但改用一隻叫做"PfuTurbo"的polymerase就無法得到該片段
(我確定酵素沒有壞掉,因為針對另一個DNA片段是可以得到產物的)
我後來是使用Takara的LA Taq(這隻也有校正功能),就得到想要的產物
但是我還是不明白,為什麼換一隻酵素,條件不變,就沒有辦法得到產物了
有高手可以解釋一下嗎?
謝謝!
※ 引述《aikawa7090 (小紅)》之銘言：
: 各位大大好，小弟最近在從cDNA做PCR，P出想要的gene，由於片段長度約
: 700Kb左右，且要的cDNA片段之後再transfect到細胞中看表現的，所以希
: 望能達到PCR出來的片段不要有任何錯誤^^
: 目前遇到的問題是，用taq能夠PCR出想要的片段，但是同樣的condition下，
: 用Pfu就PCR不出來，老師建議我用taq做PCR，並加入一點pfu做proofreading，
: 可是一加入pfu就PCR不出來了(連個band都沒有= =)
: 所以想請問大家，有沒有大大手上有廠商的pfu tag mixture的protocol，也就
: 是PCR的sample成分要如何搭(pfu加多少，taq加多少，dNTP加多少等等)
: 麻煩大家了，感恩~~
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