Re: [求救] competent cell製作

[bolly (bolly)]

我今天又試了一次  在製作過程我都盡量在冰上處理

我也是用離心管操作   所以置於冰上的步驟也都是整支插進冰裡

最後一步分裝好之後    我拿了一管直接塗在無抗生素的菌盤上

在拿另一管作transform

我的transform步驟是加入1-2ul DNA到0.2ml  competent cell

置冰上二十分鐘  再heat-shock   42度C  2min

接著在置於冰上5-10 min  因為是新鮮的competent cell

所以直接塗菌盤   沒有作修復的動作

我剛看了一下菌盤長的情況

直接塗菌盤的菌長得滿滿的   表示我製作過程應該是OK的

菌都還活著

但是有加DNA作transform的菌都沒長

我猜可能的原因是氯化鈣有問題  沒有成功的在菌上打洞

或著是我的transform還需要作修正

順帶問一下   前面有幾位提到離心機的rpm

我想如果能直接說g值會不會比較好  因為rpm會隨roter改變

直接說g值我會比較能抓條件   謝謝大家的意見

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.120.202.50
推 qumai:我們實驗室是用1000g離心
推 tsubasawolfy:為何新鮮的就不做recover呢@@? recover的用意不是要
→ tsubasawolfy:讓他先製造出足夠的anti-antibotic enzyme嘛@@?
推 williamyang:我覺得recovery很重要.以前有忘記做.後來結果超爛...
→ bolly:因為上次跟學姐作出的那批heat-shock後直接塗盤  結果爆盤
推 liner76:試試heat-shock 90sec 後,致冰上2min試試看吧!
→ liner76:後面在接懸浮培養1hr...在圖plate
→ bolly:這次換了新的氯化鈣   再試試看
→ leftt:還是要recover吧  爆盤的問題可用稀釋來解決啊