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pET-30a這載體我想要轉到DH5alpha mini-prep抽plasmid 但是抽出的plasmid量總是很低 我再養菌的LB裡有加抗生素 E. coli也都長很好 可是抽出來的plasmid就是很少 這跟我用的菌種有關嗎? 還是大家都用買的= = 我的操作是按照mini-prep kit給的protocol 基本上應該不是操作問題 至於我取的菌量是飽和菌液約2.5ml -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.202.50
tsubasawolfy:有確定它的copy number高嗎- -? 10/21 11:19
tsubasawolfy:pET我用過兩個都是要加多菌量 10/21 11:20
※ 編輯: bolly 來自: 140.120.202.50 (10/21 11:44)
bolly:所以大概需要加多少量 10/21 11:44
mtdas:養多久? 10/21 12:23
bolly:over night的菌液 10/21 12:26
bolly:我通常會養12-14hr 10/21 12:27
mtdas:確認一下Ap有無壞掉? (我遇過Ap壞掉的) 10/21 12:33
micocat:pET系列都是low copy 10/21 13:04
micocat:copy number大概是high copy 例如t-vector 的10分之1 10/21 13:05
micocat:所以… 養多一點吧~~ 10/21 13:05
tsubasawolfy:養五取四:) 10/21 13:53
bolly:瞭解了 感恩 以後把量加多 10/21 16:25
silverberry:pET 系列 copy number 約 40, 比起 high copy 的數百 10/22 02:18
silverberry:少太多了@@ 我們家養 6 mL mini-prep 抽成 50 uL 10/22 02:19
bolly:我之前大概6ml回溶100ul 難怪挺少的 10/22 15:56
sneak: pET 系列 copy https://muxiv.com 11/11 01:04
sneak: copy number https://daxiv.com 01/03 16:47