推 ftsyice:我傻了,原來N要這樣. 我現在才知道!! (恍然大悟+慚愧) 11/09 02:13
※ 引述《lazyQ (認真過每一天)》之銘言：
: 一般在做ligation時都是vector + insert 去進行反應
: 如果說現在我有2個insert，把vector + insert 1 +insert 2，加在一起
: ligase有辦法成功的將這三者接成一個環狀的plasmid嗎？
: (只是想知道這樣能否成功，不討論先接一個insert，再接另一個喔)
: (不考慮in frame,cutting site...etc這些問題的話)
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: 不是我想偷懶啦XD
: 最近做了一個clone，裡面有insert 1和insert 2
: 下一步是搬到另外一個vector(兩端的cutting site是一樣的BstXI)
: 好死不死，insert 1和insert 2中間發生mutation，跑出一個BstXI
: 這下冏了，我無法用BstXI將 insert1 - insert2 整個搬出來。
: 原本的規畫
: vector1: -------BstXI---insert1-----------insert2---BstXI----
: mutation後的結果
: vector1: -------BstXI---insert1---BstXI---insert2---BstXI----
: 這樣能理解嗎？ 我講得好亂>__<~
其實 BstXI 認的cutting site是
C C A N N N N N / N T G G
G G T N / N N N N N A C C
也就是說 當中間的N是不同時 是沒有辦法接起來的
所以 可以check一下兩邊的seq 如果不一樣 就放心做下去吧
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