[求救] 做完ligation發現有contaminte到其他東西

[Locutus (電影狂)]

我目前做construct碰到一個問題，我挑的幾個colony用restriction enzyme切都可以切下
和insert大小，我就把這幾個送去sequencing，我用的是T7 primer，從vector讀進去，可
是做sequecing的技術員說我送的sample有兩個template，的確sequence的圖有些是有兩個
peak，我就用這幾個clone做PCR，可以P出我要的大小，再把PCR product送去sequencing
，又都是我要的東西，因此我懷疑我ligation的時候有contaminte到其他東西，我又把這
幾個clone重新transform嘗試把contamination分離，我再送這些我認為去掉contaminate
的clone去sequencing，結果還是有兩個template，可見我還是沒把他們分開，我想問一下
有人有這樣的經驗嗎，我該怎麼把他們分開。

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◆ From: 219.84.236.37
※ 編輯: Locutus         來自: 219.84.236.37        (11/23 18:28)
推 blence:建議你可以換個primer,vector可能有2個T7,或2個類似的site
→ Locutus:根據data sheet這個vector只有一個T7，不過我不知道有沒有
→ Locutus:類似的site，我會換個primer，不過我比較傾向是污染
推 micocat:plasmid 稀釋10倍或100倍再去transform呢
→ micocat:有二個 template可能是e coli帶有二種plasmid
→ micocat:稀釋plasmid之後 再用colony PCR check看看