[討論] nuclear extraction

[nidus (咕嘰)]

cell membrane 與nuclear membrane成分差不多

都是層脂與一些protein

但是在抽nuclear extraction時

所使用的buffer A  B  C  D

難道就不會破壞核膜嗎?

願聞其詳

謝謝^^

Buffer A: 10 mM HEPES (pH 7.9 at 4oC), 1.5 mM MgCl2 , 10 mM KCL and 0.5 mM
DTT

Buffer B: 0.3 HEPES (pH 7.9), 1.4 M KCL and 0.03 M MgCL2

Buffer C: 20 mM HEPES (pH 7.9), 25% (v/v) glycerol, 0.42 M NaCl, 1.5 mM
MgCl2, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and 0.5 mM
DTT

Buffer D: 20 mM HEPES (pH 7.9), 20% (v/v) glycerol, 0.1 M KCL, 0.2 mM EDTA,
0.5 mM PMSF, and 0.5 mM DTT. DTT and PMSF were added fresh to the buffers
just before use.


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.155
推 hajimels:buffer A,B,C and D分別是什麼？ 願聞其詳 謝謝^^
※ 編輯: nidus           來自: 125.225.146.170      (11/30 22:24)
推 hajimels:其實我沒做過 只是想提醒原po給個solution的成分...^^""
→ hajimels:想說懂得板友可能比較好回答吧～
推 sharkcell:沒看到detergen的配方，所以對膜的傷害都不大
推 bluecsky:A B C D好像就是緩衝液加鹽類配一些protease inhibitor..
→ bluecsky:這些應該傷害性都不大 這不是考量的主因吧XD
推 bigcat24:低?度溶出細胞質 高?度溶出膜蛋白 有錯請更正
推 stinky:buffer A: 低張溶液來打破細胞
→ stinky:buffer B: 把細胞核的鹽濃度帶回
→ stinky:buffer C: 用高鹽把細胞核蛋白溶出
→ stinky:buffer D: 把溶出來的胞核蛋白帶回適當的溶液狀態
推 stinky:buffer A的低張狀態並不會打破核膜
→ stinky:我想在buffer C溶出核蛋白時核膜也還是完整的
推 Ice9:buffer B 是用來取 cytosol 的吧。buffer 是 dialysis NE用。
→ Ice9:sorry, 前句有誤。buffer D 是用來 dialysis 用的。
→ Ice9:還有每一種處理後的離心速度有差，這對分離有重要作用。
→ sneak: 把溶出來的胞核蛋白帶回 https://noxiv.com
→ sneak: 其實我沒做過 只是想提 https://muxiv.com