推 DJHINN:說明書的建議是50uM 1uL ...以前是沒有注意到這環節... 12/06 13:25
→ DJHINN:現在有注意到了...所以我重新配了一管新的MIX 再跑看看看 12/06 13:26
→ DJHINN:等一下就可以知道結果了... 謝謝你的回答啦 12/06 13:26
※ 引述《DJHINN (dj)》之銘言：
: 如果PRIMER量太過稀的話
: 會夾不出東西嗎?
: 例如
: 原本要求
: 50 micro M 要求 1 micro L
: 我配成
: 10 micro M 1 micro L
: = ="
: 結果會差很多嗎?
: 我是做 RFLP 的....
那要視您的 PCR總體積為多少 及 使用的酵素 而定
通常PCR的反應體積最大為50 uL
而酵素通常會要求primer的終濃度在一定的範圍內
舉例而言：Takara Taq要求每條primer的終濃度在 0.2 uM ~ 0.5 uM
a.若為一般50uL的PCR而言
50 uM 取 1uL 則終濃度為 1 uM → 對Takara Taq來說有點過高
10 uM 取 1uL 則終濃度為 0.2 uM
b.可以自行類推不同體積
有時候primer的濃度如果過高，可能會出現大量的primer dimer
過低又可能會影響PCR的效率
因此，建議您先閱讀一下酵素的使用說明書
再詳細計算一下primer的使用量
另外，只要看到清楚的signal
要進行RFLP應該沒有問題
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我不想在球場上當一個沒用的人
也許我真得不是很厲害
再練下去也只有這樣子...
可是.......我就是會認真地去練習
賭賭看明天會不會變強一點...
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