推 shunwang:reused resin 應該是有 recharge Ni 01/13 21:51
先謝謝pupuwu與liuse的回答~^^"
resin是reuse的, 不過每次通完後會用strip buffer洗掉Ni
Strip buffer配方如下:
400mM EDTA, 2M NaCl, 80mM Tris-HCl, pH7.9
菌量是100ml induction後離心下來的
離心完後直接加binding buffer打散 破菌
經過水洗與binding buffer equilibrate後加入sample
resin的含量約0.8ml
Wash buffer的配方為
20mM imidazole, 0.5M NaCl, 20mM Tris-HCl, 6M urea, pH7.9
用wash buffer洗前會先用binding buffer再洗一次
之後就elute了
elute buffer配方
1M imidazole, 0.5M NaCl, 20mM Tris-HCl, 6M urea, pH7.9
因為有把未loading的sample與通column後得到的flow through拿去跑PAGE
發現所欲得protein量幾乎都差不多
所以想大概是binding的問題比較高
謝謝大家的幫忙
上一篇漏講了一些細節 不好意思
謝謝!
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