Re: [求救] 關於protein purification

[boblu (六百)]

生看站死掉了 用 PTT 回

原 po 的狀況真的很微妙

denature form, 所以不太可能是 his-tag 沒有露出來

有用其他的 his-tagged protein 跑過同樣的流程發現可以
表示 protocol 大致沒有問題

我想再問一下 原 po 說有用 western 看過 lysate, flow through 跟 elute

用的是什麼抗體？是對你想純化的 protein 專一的抗體 還是 anti his-tag 的?

因為我現在想到的的最後一個可能是

雖然 construct 的序列正確

但是 his-tag 或甚至是部分 C 端可能根本沒有被 translate 出來

這樣就有可能你 PAGE 看起來好像正常

用針對該 protein 專一的抗體染也可以染

但是永遠純化不出來

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◆ From: 122.116.69.32
推 theessential:用的是抗目標蛋白N端thioredoxin的抗體,因為蛋白是實
→ theessential:驗室自己做的抗體,沒有專一性的抗體可壓~
→ theessential:我會再壓His-tag確定的,謝謝你的建議^^"
→ theessential:另外請問一下,如果真的是translation的問題的話,
→ theessential:有辦法解決嗎?  謝謝你~