推 NKTcell:嗯~ 真的有人血清沒錯 當初看到很shock 02/13 19:57
推 chvkimo:連 殺手T細胞 都出來講了 那真的很shock 02/14 01:30
※ 引述《cattailizu (眼睛一瞇瞇)》之銘言：
: 對不起 問這個問題有點蠢
: 因為一直抽同學的血來做實驗 對他很不好意思
: 以下有幾個問題，希望有經驗的人可以幫忙回答一下
: 1.PBMC算是初代細胞嗎?
: 之前有去上過細胞培養的課裡
: 老師有說 有些初代細胞可以繼代個4-8代，甚至有的細胞可以到12代
: 不知道有沒有人養過PBMC繼代的 或者是有哪些方法可以讓他增生或是活久一點
: 假設用不含任何營養物質的RPMI-1640養的話
: 大約可以活多久呢?
不行繼代，有些可以活比較久像是MONOCYTE，
或是你養成T cells blast，
看你要的是什麼細胞還有要作什麼實驗。
: 2.計數的問題
: 因為是抽同學的血 一個人大約10-14mL
: 可是用細球計數器總覺得不到2*10次方的細胞(/mL)
: 這樣的數目是合理的嗎?
: 計數的時候 連小粒的細胞也要數嗎
: 我主要是數比較大顆的?這樣做法是不是不對阿
有那種紅血球lysis buffer，沒經驗的話去用一下，以免有錯。
PBMC成人大約1.5-3 Million/ml，
如果太多可能屬錯，太少可能你FICOLL技術有問題。
: 3.看paper裡有人會加10%的FBS在RPMI-1640裡去養(但也有人不加)
: 因為ELISA會因為血清的存在或是脂質會影響分析結果
: 所以目前不太趕加FBS 但是分析IL-4跟IFN-r結果都怪怪的
: 會是因為不加FBS把血球們餓死的原因嗎?
: 以上希望有經驗的大大給我點建議
: 謝謝你們
ELISA不太怕LIPID，不用太擔心。
但是不加FBS是對的，因為加了FBS以後，
細胞都會被活化，所以CYTOKINE都會變高。
而且每批的FBS早成的影響差很多，
其實有一個簡單的作法。
就是用autolog serum就好了，或是去買人血清。
（是，不要懷疑真的有這種東西）
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過去的來不及追憶 現在的趕不及接受
得到的不懂得珍惜 失去的無法能忘記
這就是生活嗎？！
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