※ 引述《Rodrigo (另一場奮鬥的開始)》之銘言：
: 冷凍切片是背根神經節
: 染G-CSFR
: 然後用ABC
: 最後用DAB
: 屢次發現染出的切片
: Neuron的細胞核呈現淡染
: 這是正常應該出現的
: 但是其他細胞也被染到
: 而且很明顯
: 特別深的都是細胞核
: 但胞質並沒有被染到
: 如何把那些不該出現的深染細胞核消除?
: 以下是我的猜測
: 似乎Biotin會黏核酸!?
這個不太可能
雖然沒有染過神經
不過就我用ABC system的經驗是沒碰過在細胞核有non-specific binding
通常ABC system會有的非專一性染色問題
是在肝臟或腎臟等有大量endogenous biotin的場合
一抗有時也是非專一性共染的元兇
建議你做一個normal IgG的negative control
這樣你至少可以釐清可能是哪個步驟出了問題
: 在一次失誤中
: 發現切片泡過過鹼的tris buffer
: 似乎是鹼使核酸變性!?
: 使的亂染的細胞核沒有出現
: 但這不是好方法
: 因為這不是peroxidase最佳pH環境
: 如果biotin真的會黏核酸
: 那給切片處以DNase
: 或在DAB呈色之前以鹼處理
: 是否可行?
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