發信人[email protected] (飛騰阿叔),
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標 題Re: [求救] 細胞培養
發信站批踢踢參 (Wed Mar 4 08:18:57 2009)
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因為不曉得你做的細節
所以只能給你大概的建議
可以考慮一下下面的狀況
1) 請問你的 Western blot 有沒有 internal control 呢?
像是 Actin, tubulin, GAPDH, etc
Cell lysate 的蛋白質定量有時不是很準確
Bradford 會受到 Detergent 的影響
Lowry 的靈敏度差
不加 Detergent 的話 lysate 往往不均勻
所以用個 internal control 來確定定量上的大致準確度
Target 也可以用這個來標準化
2) 請問你期待的差異有多大呢?
Western Blot 定量並不容易準確
所以如果差異在 10 % 左右的話....改用別種方法吧XD
Western Blot 有幾點要注意
如果是用 HRP-ECL 呈色的話
ECL 不平均會造成差異
訊號太強會無法定量,而且會消耗 ECL 太快的話反而沒訊號
3) 你給的藥會不會在 critical treshold 附近?
那一點點的 loading error 就會造成極大的變異喔
計數細胞倒不必要
除非你對蛋白質定量產生極大的懷疑 XD
Normalize 選對方法就好
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