[求救] RIPA buffer

[willie0208 (我不要現在就出征....)]

請問各位大大
有人用過RIPA 來裂解過組織來抽蛋白嗎??
western blot一直做不出來
跟本不知道什麼問題
從源頭找 想問RIPA是可以用來抽組織的蛋白
還是只能抽CELL內的蛋白呢??
謝謝各位大大

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 203.71.94.5
推 ordinary07:可以 ripa+sample->均質sample->on ice 數分鐘
→ ordinary07:而且你做protein定量有出來嗎!? 沒出來WB也免做了 冏
→ ordinary07:有興趣可以看看abcam的WB protocol
→ willie0208:有定量出來 只是跑出來的蛋白質都很醜 我在前面有留言
→ willie0208:有我跑WESTERN得圖 一整個都很怪 找不出原因說
推 ordinary07:你把上膠拉長點 你樣品的蛋白質濃度很濃嗎!?
推 ordinary07:還有跑的時候V小點 不知道有沒有改善... 冏
→ willie0208:我的蛋白質濃度約在50microG上下 我的V分三個段落跑
→ willie0208:分別為80-20MIN 90-1hrs 100-跑到最後
推 tsubasawolfy:跑的時候多跑一組細胞的試試看就知道了
→ tsubasawolfy:看是sample本身的問題還是WB的問題
推 takumatw:趁機問一下什麼是"做蛋白定量有出來"
→ takumatw:吸光值多少或是濃度多少以上才算有出來???是這意思嘛?
推 ordinary07:OD介於你標準曲線0~最低濃度BSA點間 濃度就太低了
推 tincta:我有用ripa抽過組織和細胞做western blot ，都沒問題說
→ sneak: 有我跑WESTERN得 https://daxiv.com
→ sneak: OD介於你標準曲線0~ https://noxiv.com