[求救]SDS-PAGE,DTT treat後蛋白成single band,但位置不對

[ksn (洛)]

純化蛋白,SDS-PAGE確認時出現4個band,

為了確定是isoform 還是雜蛋白，同一管取出，分成兩管

A. 原sample + protein dye

B. 原sample + protein dye(100 mM DTT), heat 95度 5 min , ice 1 min,



跑 SDS-PAGE，Coomassie Blue 染色後發現


A. 3 bands， 大約48 kDa, 32 kDa, 16 kDa

B. 1 band    大約                19 kDa


類似下圖


A.     B.

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想請問為什麼DTT treat 後，會發生位移的情況呢？

能被解釋或是我有沒有處理好的地方嗎？？？


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.116.61.117
推 tsubasawolfy:我會比較相信B才是你要的XD 去查DTT作用就知道了
→ ksn:喔喔 另外我的意思是若為isoform 為什麼B不會到16kDa的位置呢?
推 tsubasawolfy:沒有denature狀態下分子量沒意義吧?
→ tsubasawolfy:變成只是SDS包附蛋白表面而不是依據完整的包覆
推 uokoperfect:跑SDS-PAGE了幹麻還要加dtt...維持構型?不是要看分子
→ uokoperfect:量嗎....NATIVE GEL  加了比較有意義吧
→ uokoperfect:我也認為B有加熱過DENATURE才是你要的...............
推 uokoperfect:dtt濃度高一點 的確可以打破雙硫鍵 也是有助denature
推 uokoperfect:看你的濃度應該是把雙硫鍵都打斷了吧 變線性的