推 reteporeh:我也想.> < ..可惜找不到可以問的..網路看到protocol版 03/19 13:10
→ reteporeh:本挺多的..大致流程都差不多..但都會有一點點出入.. 03/19 13:11
→ reteporeh:真的要實作後..才知道什麼才適合自己的東西 03/19 13:12
※ 引述《reteporeh (被實驗中)》之銘言：
: 1. 去做protein-DNA interaction 的DNA probe的序列長度有限制嗎？或者有最佳長度?
: 2. 我看protocol 有加poly dI dC 也有加cold unlabel probe 想請問這兩個都是
1.我做過DNA probe約200bp的，一般而言是20~200皆可
但如果你probe片段長，用的protein又是cell lysate
那可能需要用agarose gel才看的到，因孔徑較大，
不過一般都是polyacrylamide gel
2.網路上有許多免費的protocol，例如Thermo公司的。或者Current Protocol
Unit 12.2，而古老的Molecular Cloning有些基本觀念可以看看
3.做EMSA，經驗跟condition很重要，例如probe與protein的比例、
dI dC與BSA的量、加或不加，probe的製作、binding buffer的條件等，
最好還是找到可以問的Lab學一下比較快
話說我也還在奮鬥中...Orz...
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