[求救] kupffer cell trypsin-EDTA 濃度要多少才會下來?

[runpapa0520 (PAPA)]

請問利用貼盤方式洗去非kupffer cell，

culture 24hr 之後，

用D-PBS WASH

加入trypsin(?%) 作用?分鐘

加入含血清medium中合，

收集細胞做實驗。




我試過0.05% 1min--------------不動如山

我試過0.05% 2min--------------2-3成

我試過0.5%  1min--------------大約一半

我試過0.5%  2min--------------7成



請問有人有經驗嗎? 因為細包很少，沒有辦法一直試，

請有經驗的前輩告訴我，少走一些冤枉路，謝謝!!


ps我之前看文章有用到0.5%的1min，但周遭人都跟我說太膿，細胞會死，

我去染色看存活率是還可以，但不知會不會有其它影響。

我用corning 的dish。

不考慮用刮的，我需要完整的細胞。


謝謝各位的回答!




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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 118.167.7.85
推 lssunti:0.05％ 作用的溫度？ 37 or RT?
→ runpapa0520:皆是37度，放回培養箱中等。
推 humwang:有加EDTA嗎?
→ runpapa0520:我買的是trypsin-EDTA   已經有含了
推 onlyone0419:會死吧用TRPSIN，改用6.85mM EDTA only,15min 試試看
→ onlyone0419:我自己是用來打腹水巨噬細胞，供參考~