作者lazyQ (認真過每一天)
看板Biotech
標題[求救] 怎麼得知細胞有無表現我要的蛋白質?
時間Fri Apr 10 22:34:35 2009
我的實驗是要transfection一個plasmid，表現出我要的蛋白質
但是這個蛋白是會自己從細胞
secret出來。
transfection的操作沒有問題，我的ctr:帶有螢光基因的plasmid
有正常的表現，可是我要怎麼知道我的蛋白也一樣成功的被細胞
表現？
抽RNA跑RT-PCR嗎？ 或直接做western blot？
如果是做western blot，我需要lysis細胞淬取蛋白，還是直接從
medium中取得我的蛋白？ 需要注意到的細節？
謝謝
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◆ From: 61.231.194.88
※ 編輯: lazyQ 來自: 61.231.194.88 (04/10 22:36)
推 vancent:SECRETION FORM PROTEIN直接買kit收medium過column即可 04/10 23:22
→ vancent:需要注意的細節:金錢 04/10 23:22
推 tsubasawolfy:樓上中肯= = 04/10 23:26
推 hchs890843:序列有LL的leading sequence理論會跑出來 04/10 23:29
→ hchs890843:但是我老師會要我收medium與cell lysate一起跑WB 04/10 23:29
推 turtle24:medium要濃縮或冷凍乾燥 不然產量太低可能會誤判 04/11 00:20
→ sisyphus:用路西法assay作? 04/11 13:18