Re: [求救] 請教如何分離死亡與健康的懸浮式細胞?

[chvkimo (達)]

※ 引述《AronYA ( )》之銘言：
: 利用 Lenti virus 做 RNAi實驗
: 再做puromycine篩選
: 我的細胞株是懸浮式的
: puro.篩後 細胞每次繼代
: 凋亡或者不健康的細胞在離心時
: 都會跟健康的細胞一起離下來
: 進而影響繼代的品質
: 想請教有沒有人知道要利用那種溶液
: 可以將懸浮式細胞的 凋亡細胞 以及 健康細胞 分離開
: 麻煩各位了 ~

上面推文是說可以用反覆的離心方式( 離心->去上清->回溶->recycle )

我是沒有做過懸浮細胞

但是如果懷疑這種方式是否可以分離健康和不健康的細胞

我認為可以測試每次離心後的存活細胞比例

如 :

每次離心後將重新懸浮的細胞液取一點出來

再利用trypan blue計數存活及死亡的細胞比例

看看是否每次離心及再回溶的細胞液是否能增加健康的細胞比例

如果可以,再斟酌要離幾次(太多次應該是會loss細胞及花費太多時間)

有錯的話請多多指教~~ 謝謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.94.184
※ 編輯: chvkimo         來自: 163.25.94.184        (04/14 12:50)
推 st92013:那請問每一次要用多少轉速 離多久 才可以有效分離 謝謝
推 daniel2806:說實在的 這是經驗談 我們家都用1200rpm 5 min
→ daniel2806:然後是一天離一次 觀察幾天 再離一次 如果不行就會放棄
→ chvkimo:我建議你用G值測試 因為rotor直徑不一樣 RPM 就不一樣
→ chvkimo:我家一般離細胞好像都是用1000rpm 或 200g (我家的離心機
→ chvkimo:自己換算的)
※ 編輯: chvkimo         來自: 163.25.94.184        (04/15 12:33)
→ chvkimo:離5分鐘
→ chvkimo:所以 離心力 及 時間 也是參數之ㄧ