推 fungihsu:應該是因為template的污染 尤其是pcr or plasmid prep 04/27 14:53
推 fungihsu:建議用laminar flow hood 或是到沒有做pcr的bench那邊做 04/27 14:56
最近剛開始做real time PCR實驗(使用ABI.SYBR)
一開始抓primer濃度的時候,發現會NTC也會有反應
也就是dissociation curve中NTC的peak跟有template在相同的位置
本來是想說應該是污染問題
但是 換了水,重訂primer,重分裝之後,也沒有改善
(分裝的過程有戴手套跟口罩,tips也是開新的,手也沒有在tube上揮來揮去)
另做另一組==>原本的NTC再去除primer,就很乾淨
有想過是否要再做一組==>SYBR mixture+primer
或者是primer要重設計?
謝謝!!
另附其他資訊
primer F:ATCTCCTGCGAGAGCAAAGC
primer R:TGCATCTGGATGGAGCTGAA
total reaction volume=20uL,使用的是八連排的tube
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※ 編輯: snkre 來自: 140.112.130.37 (04/27 12:51)
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